Dosagem de Hemoglobina Glicosilada (Kit)

As hemácias são compostas pela proteína hemoglobina (Hb), a qual é responsável pelo transporte de oxigênio para os tecidos do nosso organismo. Esta proteína tem a capacidade de se ligar à glicose presente no sangue, cuja fração é conhecida como hemoglobina glicosilada (HbA1c). A fração que não ligada à glicose, ou seja, a hemoglobina não glicosilada, é designada como Hb AO. Desse modo, quanto maior for a taxa de glicose presente no sangue, maiores serão os valores de HbA1c.

O tempo médio de vida de uma hemácia é de aproximadamente 120 dias. Durante este período, ela vai se incorporando à glicose presente no sangue, o que nos permite avaliar a média da concentração de glicose nesses 120 dias, diferentemente da glicemia em jejum (a qual avalia as concentrações de glicose presentes sangue no momento em que foi coletado). Este exame é muito utilizado para o diagnóstico e monitoramento do Diabetes Mellitus dos tipos 1 e 2, sendo complementar à glicemia em jejum.

Valores de referência: 4 a 5,6 % (Normal).

Valores superiores podem indicar pré-diabetes (5,7 a 6,4%), diabetes (6,5 a 7%) e diabetes mal controlado (acima de 8%).

DOSAGEM DE HEMOGLOBINA GLICOSILADA POR KIT

Amostra: o sangue deve ser coletado com EDTA.

Kit:

- Reagente Lisante;

- Padrão liofilisado (concentração padrão vem indicada no rótulo do frasco);

- Tubo com resina;

- Filtro separador.

Identificar os tubos: Branco (água destilada), Padrão 1, Padrão 2, Amostra 1 (HbA1c) e Amostra 2 (Hb total); 

1- Preparo do Hemolisado:

- Adicinar 0,5 mL do reagente lisante em tubos de ensaio;

- Adicionar 0,1 mL do sangue coletado ao tubo e homogeneizar bem (Amostra);

- Adicionar 0,1 mL do sangue padrão ao tubo e homogeneizar bem (Padrão);

- Repouso por 5 minutos em temperatura ambiente.

2- Preparo da Hemoglobina Glicosilada (figuras abaixo):

- Adicionar 0,1 mL dos hemolisados (amostra e padrão preparados no item 1) aos tubos de resina do Kit;

- Tampar e homogeneizar durante 5 minutos (em vortex ou manualmente por inversão);

- Empurrar o filtro separador (do Kit) dentro de cada tubo até que a resina esteja firmemente compactada no fundo dos tubos;

- Transferir os sobrenadantes contidos nos filtros separadores para as respectivas cubetas (Amostra 1 e Padrão 1);

3- Preparo da Hemoglobina Total:

- Adicionar 5 mL de água destilada em cada tudo;

- Adicionar 0,02 mL do hemolisado (preparado no item 1) ao tubo "Amostra 2" e homogeneizar;

- Adicionar 0,02 mL do sangue padrão hemolisado (preparado no item 1) ao tubo "Padrão 2" e homogeneizar;

4- Leitura:

- Ajudar o equipamento em absorbância zero a 415 nm, utilizando água destilada como Branco;

- Ler e anotar as absorbâncias dos tubos Padrão (1 e 2) e Amostras (1 e 2).

CÁLCULOS:

A porcentagem de hemoglobina glicosilada é determinada calculando-se a proporção das absorbâncias das duas hemoglobinas (glicosilada e total) da amostra, dividida pela proporção obtida das hemoglobinas (glicosilada e total) do Padrão e o resultado multiplicado pela porcentagem do Padrão (%):

Amostra % = Proporção da Amostra/Proporção do Padrão x Concentração do Padrão

Onde: 

Proporção da Amostra = Hemoglobina Glicosilada da Amostra/Hemoglobina Total da Amostra

Proporção do Padrão = Hemoglobina Glicosilada do Padrão/Hemoglobina Total do Padrão

Referência

Instruções do Kit em PDF.