Curva de Absorção X Curva de Calibração

A curva de absorção é utilizada para medir o comprimento de onda ideal de uma técnica. Quando uma substância é submetida a várias leituras de absorbância em espectrofotômetro ao longo de uma faixa de comprimento de onda eletromagnética, é possível avaliar a sua capacidade de absorção de luz. Essa absorção é representada graficamente através dos valores dos comprimentos de ondas e suas respectivas absorbâncias, formando a curva de absorção.

Como exemplo, foi realizada uma Curva de Absorção da Glicose utilizando uma faixa de leitura entre 400 e 600 nm de comprimento de onda eletromagnética. Cada comprimento de onda foi lido e seus valores de absorbâncias correspondentes foram anotados conforme a tabela abaixo:

Através dos valores dos comprimentos de onda e suas respectivas absorbâncias, é possível confeccionar um gráfico da curva de absorção da glicose. A partir do gráfico podemos observar que o valor de absorbância ideal para medir a concentração da glicose é de 505 nm.

A curva de calibração, por sua vez, corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância e os de concentração de uma determinada substância. Através do gráfico é possível verificar a linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de absorbância em concentração. São utilizados calibradores com concentração conhecidas com objetivo de determinar suas respectivas absorbâncias, sendo que quanto maior a concentração da substância, maior sua absorbância. Isso permite transformar a cor em número.

Segundo a Lei de Lambert Beer, a intensidade da luz emitida decresce exponencialmente à medida que a espessura do meio absorvente aumenta aritmeticamente.

Como exemplo, foi realizada uma Curva de Calibração da Glicose utilizando concentrações conhecidas de 100 mg, 70 mg e 52 mg. Cada concentração foi lida em um comprimento de onda de 505 nm e seus valores de absorbâncias correspondentes foram anotados conforme a tabela abaixo:

Através dos dados obtidos, é possível confeccionar um gráfico da curva de calibração da glicose, como mostrado acima. 

O valor de R² da reta (coeficiente de determinação) pode ser calculado a partir do gráfico. Quanto mais próximo do valor 1,0, melhor será a curva em relação à amostra.

Referências:

http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/curvapadrao.html

http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/conceito.html

http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/espectrodeabsorcao.html