A Coloração de Gram baseia-se em reações tintoriais que permitem identificar as diferenças químicas das estruturas da parede celular bacteriana. As bactérias Gram positivas, por possuírem uma parede celular mais espessa contendo peptidioglicanos, não são descoradas ao entrarem em contato com o álcool-cetona, por isso retêm a coloração roxa/azul. As bactérias Gram negativas, por sua vez, possuem uma baixa quantidade de peptidioglicanos além de uma camada de lipídeos, polissacarídeos e lipoproteínas, por isso são descoradas e contracoradas, tornando-se rosas/vermelhas.
Fonte: TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 10 ed. Porto Alegre: Artmed, 2012. p. 70.
Após a realização do esfregaço, secagem e fixação pelo calor, a lâmina passará por etapas de coloração:
1- Primeiramente será realizada a coloração primária utilizando o Cristal Violeta, durante 1 minuto, no qual o corante púrpura irá impregnar todas as células;
2- Em seguida, a lâmina será lavada e recoberta com Iodo (mordente) por mais 1 minuto;
3- Na próxima etapa, o esfregaço será receberá uma solução descolorante de álcool-cetona, durante 15 segundos, que irá remover a cor púrpura apenas de bactérias Gram negativas (tempo)
4- Por fim, após o enxágue da lâmina, a mesma será recoberta com Safranina (corante básico) por 30 segundos.
Ao final de todas as etapas, o esfregaço será lavado e seco, para posterior análise em microscópio.
Esta coloração tem uma grande importância médica, uma vez que é capaz de fornecer informações para o tratamento de doenças.
Cocos Gram Positivos
Bacilos Gram Negativos
Referências Bibliográficas:
TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 10 ed. Porto Alegre: Artmed, 2012.
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