Coloração e Contagem de Reticulócitos

Reticulócitos são eritrócitos imaturos (que estão nos estágios finais de diferenciação celular) recém liberados da medula óssea que ainda apresentam material genético (RNA ribossômico).

A maturação do reticulócito ocorre em aproximadamente 4 dias: sendo os primeiros 3 dias na medula óssea e, quando liberados na circulação sanguínea (nas últimas 24 horas), completam a sua maturação diferenciando-se em eritrócitos (hemácias maduras). 

A contagem de reticulócitos no sangue é importante uma vez que através dela é possível avaliar a integridade funcional da medula óssea. Para isso, estas células precisam ser tratadas com corantes supravitais (como o azul de cresil brilhante ou o azul de metileno novo), que são capazes de corar o RNA ribossômico nelas presentes. 

O número normal de reticulócitos independe de idade ou sexo, e varia entre 0,5 a 2% (ou de 35.000 a 120.000 mm3) em relação à porcentagem total de hemácias. O aumento da porcentagem de reticulócitos (reticulocitose) é indicativo de eritropoese aumentada, observado em casos de anemias hemolíticas, por exemplo, mas também pode ser indicativo de hiperplasia medular. Resultados abaixo dos valores de referência indicam hipoplasia medular. 

COLORAÇÃO

1- Em um tubo de hemólise, adicionar 100 μL de Azul Cresil Brilhante;

2- Neste mesmo tubo, adicionar 100 μL do sangue total com EDTA (ou seja, propoção 1:1 ou v/v);

3- Homogeneizar e deixar 15 minutos em banho-maria;

4- Após este período, retirar do banho-maria e homogeneizar novamente;

5- Realizar o esfregaço sanguíneo normalmente e esperar secar;

6- Realizar a leitura em microscópio óptico com objetiva de imersão (aumento de 1000x).

  

 

CONTAGEM:

1- Contar os reticulócitos presentes em 10 diferentes campos (anotando quantos reticulócitos foram encontrados em cada campo);

2- Anotar a média dos campos.

A partir da média de reticulócitos contados, deve ser calculada a % em relação à quantidade total de hemácias no sangue. Para isso, é necessário saber o valor do hematócrito (Ht) do paciente e a quantidade de hemácias.

 Exemplo:

Média de reticulócitos: 2
Hemácias: 4.200.000/mm3
Hematócrito: 43%

2 x 43 / 45 = 1,9% de reticulócitos

4.200.000 --- 100%
x -------------- 1,9%

x = 79.800 reticulócitos/mm3